熒光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發光譜、發射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數，從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定， 不但可以做一般的定量分析， 而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化， 從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發波長掃描范圍一般是190~650nm，發射波長掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
 

　　熒光光度計的操作步驟：
 

　　1.開機：接通電源，打開主機開關，點燃(打開)光源后，根據說明書要求啟動計算機。
 

　　2.檢測前準備：參照儀器說明書，在20天內至少進行一次激發校準和發射校準，檢測前儀器應預熱。
 

　　3.工作條件的選擇：環境溫度應在20℃±5℃;相對濕度不大于70%;電源穩定，無磁場、電場干擾。根據樣品的特性及熒光強度，選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應時間等)。
 

　　4.基本測定
 

　　(1)熒光激發光譜測定
 

　　設置儀器參數，掃描發射波長，找到maxλem，以此為發射波長，記錄發射強度作為激發波長的函數，便得到激發光譜。
 

　　(2)熒光發射光譜測定
 

　　設置儀器參數，掃描激發波長，找到maxλex，以此為激發波長，記錄發射強度與發射波長間的函數關系，便得到熒光發射光譜。
 

　　(3)差譜測定
 

　　設置儀器參數，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發射光譜并儲存起來，在一定的工作方式下，掃描樣品溶液的發射波長，得到當時的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。
 

　　(4)峰面積積分
 

　　選擇適當的工作方式，對樣品溶液進行積分操作，即得到峰面積積分。
 

　　(5)熒光強度
 

　　選擇合適的測量參數，設置λex、λem，采用定點讀數或掃描方式，即可測得所選波長處的熒光強度。
 

　　(6)定量測定
 

　　配制一系列已知濃度的標準溶液，在一定的測定條件下，設置λex、λem，按照由稀至濃的次序，測定標準溶液的熒光強度，繪制熒光強度—濃度的工作曲線，不改變儀器參數測定未知溶液的熒光強度，由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。